含有脂酶的细菌能分解脂肪形成游离的脂肪酸，使培养基中的维多利亚蓝与脂肪结合的无色化合物中的维多利亚蓝释放出来，而出现深蓝色为阳性。该试验主要用于厌氧菌的鉴别。细菌还原硝酸盐成亚硝酸盐的能力是区别细菌属和种的重要特征。使硝酸盐还原的细菌从硝酸盐中获得氧而形成亚硝酸盐和其他还原性产物，与培养基中加入的α-萘胺和对氨基苯磺可形成红色重氮化合物染料（N-a-萘胺偶氮苯磺酸）。